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DNase I是一种可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA，其活性非常依赖于Ca²⁺水平，并能被Mg²⁺或Mn2+激活。Mg²⁺存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；Mn2+存在条件下，DNase I能在大约相同的位点剪切DNA的两条链，从而得到带有平末端或1～2个核苷酸突出的粘末端。

本制品不包含甘油等影响冻干工艺的成分，是将DNase I及赋形剂等试剂预混后制成的冻干粉，冻干粉外观颜色均匀，呈块状或海绵团块结构，孔隙致密。仅需加入RNase-Free Water即可快速复溶后使用。

• 制备不含DNA的RNA样品；
  
• RT-PCR反应前RNA样品中，去除基因组DNA等可能的DNA污染；
  
• 体外T7、T3、SP6等RNA聚合酶催化的体外转录后去除DNA模板；
  
• 用于足迹法分析DNA-蛋白质相互作用；
  
• 与DNA聚合酶I一起用于切口平移；
  
• 二价锰离子存在条件下，使DNA片段化，产生DNA随机片段文库；
  
• 细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

• 加入RNase-Free Water可快速复溶；
  
• 无需冷链运输，可在室温及2～8℃保存；
  
• 无需加入反应buffer即可完成反应。

一个活性单位是指，37℃条件下，10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量。

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

• 此试剂为冻干品，复溶后若需长期保存，建议分装后于-20℃±5℃保存。
  
• 使用时将复溶后的酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃±5℃保存。
  
• 金属离子螯合剂，0.1%SDS、DTT、巯基乙醇等对酶有抑制作用。

• 冻干粉复溶：将样品加入100μL RNase Free Water制备成1U/μl的DNase I溶液，可根据实际使用需求加入RNase-Free Water，以此制备不同活性单位的DNase I溶液，溶解后的剩余试剂可置于-20℃±5℃保存。
  
• 去除RNA样品中污染的基因组DNA：
  
  • 将样品放置在冰盒上，在冰上配制如下反应体系：
    

    成分	用量
    模板RNA	1μg
    DNase I(复溶后，1U/μL)	1μL(1U)
    RNase抑制剂(40U/μL)	0.5～1μL(可不加)
    RNase-Free Water	至10μL

  • 混匀后瞬时离心，37℃孵育30分钟；
    
  • 加入终浓度为2.5mM的EDTA，65℃加热10分钟终止反应。
    
    • RNA在加热时容易降解，可以用苯酚/氯仿抽提去除DNase，乙醇沉淀RNA。
• 体外转录后去除DNA模板：
  
  • 按照每微克DNA模板，加入2U DNase I (复溶后，1U/μL)，注意酶的用量可根据实际需要优化；
    
  • 37℃孵育15分钟；
    
  • 加入终浓度为2.5mM的EDTA，65℃加热10分钟终止反应。
    
    • RNA在加热时容易降解，可以用苯酚/氯仿抽提去除DNase，乙醇沉淀RNA。